淺析慢病毒包裝的主要流程

 　　慢病毒屬是反轉(zhuǎn)錄病毒科下的一個屬，包括8種能夠感染人和脊椎動物的病毒，原發(fā)感染的細胞以淋巴細胞和巨噬細胞為主，感染個體zui終發(fā)病，慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長達數(shù)年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱為慢病毒，例如：人類免疫缺陷病毒(HⅣ）、猴免疫缺陷病毒(SⅣ）、馬傳染性貧血(EIA）、貓免疫缺陷病毒(FⅣ）等等。
　　慢病毒包裝的主要流程：
　　1、慢病毒載體的構(gòu)建：根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建慢病毒載體，如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過表達的慢病毒載體、用于啟動子活性研究的慢病毒載體等；
　　2、慢病毒包裝過程：將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至包裝細胞中，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細胞中測定并標(biāo)定病毒滴度。
　　慢病毒包裝的注意事項：
　　1、在慢病毒感染細胞前，為檢測病毒上清培養(yǎng)液內(nèi)病毒的活性，并確定病毒與轉(zhuǎn)染細胞之間的比率，需要確定病毒的滴度。病毒的滴度可以通過轉(zhuǎn)染Hela細胞，然后使用抗體篩選穩(wěn)定的細胞轉(zhuǎn)染株，進行計數(shù)和數(shù)值統(tǒng)計。
　　2、在慢病毒轉(zhuǎn)染細胞的過程中zui重要的一步是融合，只有一些較小的慢病毒載體才能轉(zhuǎn)導(dǎo)進細胞，因此，病毒顆粒的吸附是慢病毒轉(zhuǎn)染的限速步驟。
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